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【摘要】 目的建立三七超微粉的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别三七；使用激光粒度检测仪对粒径进行检测；HPLC 法测定三七超微粉中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1含量。结果薄层图谱斑点清晰，可鉴别出与三七的对应斑点；三七超微粉的中位径在15 μm以下；三七皂苷R1 在0.535～3.210 μg 范围内线性关系良好( r =1.000) ,平均回收率103.08% ,RSD = 2.80%；人参皂苷Rg1 在2.225～13.350 μg 范围内线性关系良好(r = 1.000) ,平均回收率100. 33% , RSD=2.29 %；人参皂苷Rb1在2.205～13.230 μg范围内线性关系良好(r = 1.000),平均回收率101.00%, RSD = 1.43 %。结论所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于三七超微粉的质量控制
【关键词】 三七超微粉 粒径 高效液相 薄层色谱 质量标准
Abstract:ObjectiveTo develop a quality standard for super micropowder of notoginseng.Methods Qualitative analysis of micropowder of notoginseng was carried out by TLC. The particle diameter was detected with laser scattering particle size distribution anaslyzer. An RP - HPLC method was used for the content determination of the Notoginsensode R1, ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1. ResultsThe chromatographic spots of micropowder of notoginseng were identified without the interference of negative control. Micropowder of particle average diameter was below 15μm. Notoginsensode R1 had a good linearity in the range of 0.535～3.210 μg (r = 1.000) ,and the average recovery was 103.08% with RSD of 2.80%. Ginsenoside Rg1 had a good linearity in the range of 2.225～13.350 μg (r=1.000) ,and the average recovery was 100.33 % with RSD of 2.29 %. Ginsenoside Rb1 had a good linearity in the range of 2.205～13.230 μg ( r= 1.000) ,and the average recovery was 101.00% with RSD of 1.43%. ConclusionThis method is simple ,accurate and repeatable. It can be used to determine ginsenoside Rg1，ginsenoside Rb1and notoginsensode R1 in micropowder of Notoginseng.
Key words:Micropowder of Notoginseng; Particle diameter; HPLC; TLC; Quality standard
三七(Radix Notoginseng)为常见的贵重药材，目前市场上的三七超微粉已经较为普遍，但对三七超微粉的质量标准研究的文献报道较少，本课题采用薄层定性鉴别，使用激光粒度检测仪对三七超微粉的粒径进行检测，并在参考文献［1］的基础上，同时测定三七超微粉产品中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。方法简便、准确、重复性好，可用于三七超微粉的质量控制。
1 仪器与试药
HP1100高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，四元泵，Sartorius BP211D电子分析天平，乙腈、甲醇（HPLC级），水为重蒸馏水，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1，人参皂苷Re，三七皂苷R1对照品及三七对照药材(均由中国药品生物制品检定所提供)，三七超微粉样品为本实验室制备。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别 取本品0.8 g，加水5滴，搅匀，加以水饱和正丁醇5 ml，密塞，振摇10 min，放置2 h，离心，取上清液，加3倍量以正丁醇饱和的水，摇匀，放置使分成层（必要时离心），取正丁醇层，蒸干，残渣加1 ml甲醇使溶解，作为供试品。取人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1，人参皂苷Re及三七皂苷R1加甲醇制成1 ml各含0.5 mg的混和溶液，作为对照品溶液。另取三七对照药材0.8 g，照供试品溶液制备方法，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［《中国药典》（2005版）Ⅰ部附录ⅥB］实验，吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）10℃下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，检视。供试品色谱中，在对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。如图1。
1.三七混和对照品 2.三七对照药材 3，4，5.三七超微粉样品
图1 三七超微粉薄层鉴别图（略）
2.2 三七超微粉粒径检测取3批三七超微粉样品，每批取0.07 g，加1 ml乙醇润湿后，加50 ml水，超声1 min后立即使用激光粒度检测仪进行检测。结果表明所取样品的中位径均在15 μm以内。结果见表1和图2。
表1 三七超微粉粒径检测结果（略）
图2 三七超微粉粒径检测
2.3 三七超微粉含量测定
2.3.1 色谱条件分析 依利特ODS柱（150 mm×4. 6 mm ,5 μm）；检测波长203 nm；柱温20℃；流速为1 ml/min,流动相A(乙腈)和B（水）进行梯度洗脱。结果见表2。
表2 梯度洗脱程序表（略）
2.3.2 标准品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1和三七皂苷R1适量用甲醇溶解制备成含三七皂苷R1对照品0.107 mg/ml，人参皂苷Rg1对照品0.455 mg/ml和人参皂苷Rb1对照品0.441 mg/ml的混和对照品溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤后备用。
2.3.3 供试品溶液的制备精密称取三七超微粉约1 g，精密加入甲醇50 ml，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上回流煮沸2 h，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤即得。 2.3.4 测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值。按外标法以峰面积计算，即得。
2.3.5 色谱分离结果在上述色谱条件下，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1 和三七皂苷R1与共存的其他化学成分达到良好的分离。结果见图3。
1.三七皂苷R1 2.人参皂苷Rg1 3.人参皂苷Rb1
a 三七对照品 b三七超微粉样品
图3 三七超微粉高效液相色谱图谱（略）
2.3.6 标准曲线的制备取标准品混和溶液，分别进样5，7，10，15，20，25，30 μl，以峰面积为纵坐标Y，进样量（μg）为横坐标X进行线性回归。结果见表3。
2.3.7 精密度实验取同一份供试品溶液,按上述色谱条件,连续进样6 次,测定峰面积积分值,三七皂苷R1，人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的RSD 分别为1.45%，1.81%，2.02%。
2.3.8 稳定性实验 取同一份样品溶液,放置0 ,1 ,2 ,4 ,6 ,8 h ,按上述色谱条件,分别测定峰面积积分值,三七皂苷R1，人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的RSD分别为1.68%，1.81%，2.43%。
2.3.9 重复性实验 精密称取同一批的三七超微粉样品6 份,按上述方法试验,分别测定样品中三七皂苷R1，人参皂苷Rb1 和人参皂苷Rg1的含量，结果 三七皂苷R1 的平均含量为0.82%，RSD为1.84%；人参皂苷Rb1的平均含量为3.36%，RSD为2.38%；人参皂苷Rg1的平均含量为3.01%，RSD为2.54%。
2.3.10 加样回收率实验取已知含量的同一批号样品,研细,精密称取6 份,每份约1 g (相当于含三七皂苷R1约0.008 1 g，人参皂苷Rg1约0.030 8 g和人参皂苷Rb10.030 7 g) ，按上述方法实验,分别测定样品中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量,结果平均回收率分别为103.08%, 100.33%，101.00%，RSD 分别为2.80%，2.29%，1.43%(n = 6) 。结果见表4。
表3 三七超微粉标准曲线（略）
表4 三七超微粉加样回收率（略）
2.3.11 样品含量测定按上述色谱条件和测定方法,对自制的三七超微粉样品进行含量测定,测定结果。结果见表5。
表5 样品含量测定结果（略）
3 结论
超微粉碎技术是为适应中医药现代化的需要而发展起来的一种新技术，三七经超微粉碎后，其粉体性质发生了某些变化，这些变化可能会对三七超微粉的质量有影响，为此，我们对三七超微粉质量标准进行了研究。
采用薄层鉴别、粒径检测和含量测定相结合的方法对三七超微粉的质量标准进行研究，结果三七超微粉的薄层鉴别清晰，与对照品在同位置显相相同，粒径检测可见其中位径在10.74 μm，含量测定符合药典标准。
对三七超微粉质量标准的研究，也为控制市面上各种三七超微粉制剂建立了可控的质量标准，有利于规范市场。
4 讨论
在薄层鉴别时，考察了流动相三氯甲烷醋酸乙酯甲醇水（15∶40∶22∶10），发现在展开后斑点较散，不圆整，使用三氯甲烷甲醇水（13∶7∶2）后，斑点圆整，分离度好。
本研究在粒径控制上，不仅使用了激光粒度检测仪进行测定，还考查了使用电镜观察超微粉粒径，观察发现超微粉粒径均较小，符合中位径在15 μm以下的要求，由于电镜在粒径大小的控制方法上有一定难度，故只作为参考，不纳入质量标准。结果见图4。
图4 三七超微粉电镜检测结果（略）
本研究以三七皂苷R1，人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1为定量指标，在《中国药典》的基础上进行了改进，出峰时间在35 min能较好地分离样品中待测成分，此方法更加简便、可行。
考察DiamonsilTMC18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm）和Hypersil ODS C18 (150 mm×4. 6 mm ,5 μm)不同色谱柱对样品中皂苷分离的影响，结果证明两种不同型号的色谱柱均有较好的分离效果。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：10. |
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发表于 2014-8-19 18:21:41
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