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【摘要】 目的观察拳参正丁醇提取物对豚鼠离体左心房兴奋性及功能性不应期的影响，并探讨其作用机制。方法采用豚鼠离体左心房测定拳参正丁醇提取物对其强度-时间曲线及功能性不应期的影响。结果拳参正丁醇提取物可使豚鼠离体左心房强度-时间曲线上移，功能性不应期缩短，且有明显的剂量依赖性。结论 拳参正丁醇提取物可明显降低左心房的兴奋性，缩短功能性不应期，且有明显的剂量依赖性。其机制可能通过抑制心肌细胞膜电压依赖性钠通道及促进3相K+外流作用有关。
【关键词】 拳参正丁醇提取物 左心房 兴奋性 功能性不应期
Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Polygonum Bistorla's n-Butyl alcohol extract (PBNA)on excitability and functional refractory period (FRP) of excised guinea pig pulmonary atrium and to discuss its mechanism. MethodsThe effect of PBNA on excised guinea pig pulmonary atrium was investigated by intensity-time curve and FRP. ResultsPBNA upper-shifted intensity-time curve and shortened FRP on excised pulmonary atrium which was in proportion with the extract's dosage. ConclusionPBNA has an effect of reducing excitability and shortening FRP of excised pulmonary atrium in a manner of dosagedependent. It may work through inhibiting membrane voltagedependent Na+ channel and promoting an outflow K+ with cardiac muscle cells.
Key words：Polygonum Bistorla's n-Butyl alcohol extract; Pulmonary atrium; Excitability; Functional refractory period
拳参Polygonum Bistora L别名草河车，系蓼科植物的干燥根茎。具有清热、镇惊、理湿、消肿、镇痛等功效。主要成分为没食子酸、丁二酸、槲皮素、槲皮素5OβD葡萄糖苷、原儿茶酸等［1］。其中槲皮素的药理作用研究较多，具有抗癌［2，3］、止泻［4，5］、抑制血小板聚集［6］、心肌保护、抗氧自由基［7～11］等作用。本课题组曾报道其水提取液具有抗心律失常［12］及镇痛作用［13］，其正丁醇提取物(Polygonum Bistorla L. nButyl Alcohol Extract)具有中枢抑制［14］、镇痛［15］、心肌缺血［16］及心肌缺血再灌注损伤的保护等［17］作用。现报道其正丁醇提取物对豚鼠离体左心房兴奋性及功能性不应期（FRP）的影响。
1 材料
1.1 药物 拳参正丁醇提取物（Polygonum Bistorla L. nButyl Alcohol Extract PBNA）由沈阳药科大学中医药学院植化教研室邱峰博士提供，实验前用双蒸水稀释至所需浓度。
1.2 动物 豚鼠购自赣南制药厂实验动物中心，体重300～400 g，雌雄各半。
1.3 仪器 HHS1-2电热恒温水浴锅，上海跃进医疗器械厂；JZ100型10g张力换能器（北京新航兴业科贸有限公司）；LHGI型离体器官恒温灌流仪，南昌市志成医疗器械研究中心产品；MedlabU/4CS生物信号采集处理系统（南京美易科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 方法健康豚鼠，雌雄各半，体重300～400 g，击头剖心，在持续充纯氧的条件下，分离左心房。将左心标本的一端固定于含20 ml改良Krebs营养液〔成分（mmol·L-1）如下：NaCl 120.00，CaCl2 2.20，KCl 5.40，MgCl2 1.0，NaHCO3 25.00，Glucose 5.6，pH 7.2～7.4〕的灌流槽内，另一端固定在JZ100型张力换能器上，并将信号输入至Medlab物信号采集处理系统。持续通入纯氧，恒温（30±0.5）℃。左心房插入两根铂金刺激电极，在实验过程中保持两电极之间的距离不变，调整静息张力为1.0 g。标本稳定45 min后开始以下实验。
2.1.1 PBNA对左心房兴奋性的影响左心房稳定45 min后，用Medlab系统的刺激器输出的自动幅度调节刺激方式，频率为1 Hz，幅度增量为0.01 mv，测定给药前不同波宽（0.3，0.5，1，3，5，10 ms）时左心房的兴奋阈值，采用累积给药法给药，终浓度为0.1，1，10 μg·ml-1递增，给药间隔10 min/UQW ，每5 min测1次不同波宽的兴奋阈值，取两次的均值进行统计，并绘制出强度-时间曲线。
2.1.2 PBNA对左心房功能性不应期的影响左心房稳定45 min后，用Medlab系统的刺激器输出的主周期刺激方式，先测出波宽为3 ms时的阈值，再采用自动间隔调节刺激方式，频率为1 Hz，波宽3 ms，5倍阈电压，测出给药前左心房的FRP，开始刺激后，波间隔则自动增加，当出现第2个刺激引起可见的收缩时，此时两脉冲间的最短时间即为FRP［18］。采用累积给药法给药，终浓度为0.01×3，0.1，0.1×3，1，1×3，10，10×3 μg·ml-1递增，给药间隔10 min/次，每5 min测1次FRP，取两次的均值进行统计。
2.1.3 统计学分析实验数据采用Graphpad prism4.0软件进行单因素方差分析,结果以折线图及柱状图表示，P＜0.05认为有统计学意义。 2.2 结果
2.2.1 PBNA对左心房兴奋性的影响PBNA对左心房兴奋性的影响结果以阈值大小表示，给药前波宽为0.3 ms时阈值为1，其它阈值=测得的阈值/给药前波宽为0.3 ms时所测得的阈值，结果见图1。结果表明，0.1 mg/ml及1 mg/ml的PBNA可使各波宽的阈值升高，强度-时间曲线上移，兴奋性降低。
图1 拳参正丁醇提取物对强度-时间曲线的影响（略）
2.2.2 PBNA对左心房功能性不应期的影响PBNA对左心房功能性不应期的影响以功能性不应期比表示，给药前阈值为1，功能性不应期比=给药后测得的功能性不应期/给药前测得的功能性不应期，见图2。结果表明，拳参正丁醇提取物（0.1，0.1×3，1，1×3，10，10×3 μg·ml-1）具有缩短左心房功能性不应期的作用，且呈明显的剂量依赖性负性作用。
图2 拳参正丁醇提取物对收缩幅度的影响（略）
3 讨论
本实验结果证明：PBNA可使离体豚鼠左心房在不同波宽的电刺激下阈值均升高，强度-时间曲线上移，兴奋性降低，可使左心房的功能性不应期缩短，两者都呈现明显的剂量依赖性。心肌的兴奋性高低主要是决定于心肌细胞膜上的钠通道状态及静息电位（RP）水平的高低，而RP水平主要取决于静息时细胞膜对钾通透性。PBNA能降低左心房的兴奋性，提示其可能通过抑制电压依赖性钠通道，从而抑制细胞外钠离子内流，导致左心房的兴奋性降低；亦可能通过抑制静息状态下的钾通透性，从而使静息电位水平下移，引起兴奋性降低。这有待进一步研究。
Ⅰb类抗心律失常药利多卡因［19］通过明显促进3相K+外流及阻滞2相Ca2+内流，而缩短动作电位时程（APD）、有效不应期（ERP）及FRP，由于缩短APD较ERP显著，使ERP/APD比值增大，有利于消除折返，产生抗心律失常作用［20］。PBNA具有缩短FRP的作用，提示其可能有促进3相K+外流的作用。
因此，我们认为PBNA的抗心律失常作用可能与其抑制心肌细胞膜电压依赖性钠通道及促进3相K+外流作用有关。
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发表于 2014-8-19 18:15:45
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