胡颓子对人胃癌细胞增殖抑制的实验研究

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【摘要】  目的探讨胡颓子对人胃癌SGC–7901细胞增殖抑制作用。方法Wistar大鼠随机分为5组，（1）对照组：自由饮食，（2）胡颓子组：以浓度250，500，1 000 mg/L胡颓子果实水煎液ig,（3）5-氟尿嘧啶（5-Fu）组：50mg/kg.wb 5-Fu ip。1周后取各组大鼠血清＋RPMI-1640培养胃癌SGC -7901细胞，采用MTT法测定不同血清对胃癌SGC -7901细胞增殖的影响。结果胡颓子对胃癌细胞的增殖有显著的抑制作用(P<0.01),且抑制率随药物浓度的升高而增高，存在明显的量效关系。结论胡颓子对SGC-7901细胞增殖具有抑制作用。

【关键词】  胡颓子 胃癌 增殖

　　Abstract：ObjectiveTo detect the inhibition effect of decoction of elaeagnus on proliferation in human gastric carcinoma cell SGC-7901.MethodsGastric carcinoma cell SGC-7901 was treated with rat serum which collected from rats fed with decoction of elaeagnus or administrated with 5-fluoro-2,4(1H,3H).Cell proliferation was assayed by MTT method.ResultsElaeagnus significantly inhibited the proliferation of gastric carcinoma cells in a dose-dependent manner (p<0.01).ConclusionElaeagnus has the function of inhibiting gastric carcinoma cell proliferation.

　　Key words：Elaeagnus;  Gastric carcinorua;  Proliferation
   
　　胡颓子科有沙棘属(Hippophae L.)和胡颓子属(Elaeagnus L.)。胡颓子属我国有55种［1］，本属为珍贵的药食两用植物 ,其植物果实中氨基酸（包括8种必需氨基酸）、有机酸、维生素C、微量元素、多糖类等含量明显高于栽培果树，还含有生物类黄酮、挥发油、萜类和甾体等物质［2～5］，其果实酸甜宜食用。
   
　　有关胡颓子止咳平喘、涩肠止泻、活血祛淤以及治疗消化不良等已有报道［5～6］。本实验就胡颓子果实对体外SGC-7901细胞增殖的影响进行了研究。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  胡颓子果实水煎液(野生胡颓子果实于2006-04采自湖北恩施土家族苗族自治州巴东野三关,挑选上好果实用水煎煮3次,过滤后,浓缩成1 g·ml-1（1 kg·L-1）溶液, -20℃冻存备用；5-氟尿嘧啶（5-Fu）,上海旭东海普药业有限公司。四甲基谷氮噢盐(MTT )、二甲基亚矾( DMSO)，Sigma公司；RPMI-1640培养基为Gibco公司产品。

　　1.1.2  CO2培养箱，NAPCO-5410型；酶标仪，BIO-RAD550型。

　　1.1.3  人胃腺癌细胞 SGC-7901 购自上海细胞生物学研究所。

　　1.1.4  动物Wistar大鼠,雄性,体重250～300 g(由湖北省实验动物中心提供)。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  含药动物血清的制备大鼠40只，随机分为5组，每组8只，分别ig和ip：(1)对照组，自由饮食；（2）胡颓子给药组（250，500，1 000 mg /kg·7 d)，连续7d，第7次ig 6h后取血；（3）5-Fu阳性对照组, 50 mg/kg·7 d. ip；均断头取血，分别于4℃,2 000 r/min离心20 min，分离血清,56℃灭活30 min后分装，-20℃冻存备用。

　　1.2.2  细胞增殖抑制试验 (MTT还原法)取对数生长期的SGC-7901细胞，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液调整细胞悬液浓度为1.0×107个/L接种细胞于96孔培养板，每孔200 μl， 置37℃，5 % CO2，饱和湿度的培养箱内培养24 h，后更换不含胎牛血清的1640培养液再培养24 h，使细胞同步化；弃上清，各组分别换以含10%相应大鼠血清的RPMI-1640 培养液，每个组设6个复孔培养48 h；再每孔加入5 mg/ml MTT溶液20 μl, 继续孵育4 h,弃上清后再加入200 μl DMSO,微量震荡器振荡10 min，立即用酶标仪测定490～595 nm波长吸光度值(OD)。重复实验2次。　细胞抑制率(%)=1-（试验组吸光度值/ 对照组吸光度值）×100%
　　1.3  统计学分析统计学分析采用SPSS 11.0软件，结果以±s表示。

　　2  结果
   
　　MTT测定：  胡颓子血清组与阴性对照组比较,在250～1 000 mg/L浓度范围内，其A值随着药物浓度的增加逐渐减小，表明含胡颓子的血清对胃腺癌细胞增殖有显著抑制作用 (P<0.01)；且随胡颓子剂量的增加对胃癌细胞的抑制率增加 ,有明显相关性。浓度500，1 000 mg/L的胡颓子血清对胃癌细胞抑制率分别为 27.59%和 44.19% ,与5-Fu组对胃癌细胞增殖的抑制作用相当（P＞0.05)。结果见表1。

　　表1  不同血清对SGC-7901细胞增殖的影响（略）

　　与对照组比较，aP<0.01;gn 5-氟尿嘧啶组比较，bP>0.05;n=8

　　3  讨论
   
　　本实验结果表明，胡颓子果实具有抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。其抑制胃癌细胞生长的抑制率随药物浓度的升高而增高，存在明显的量效关系。
   
　　胡颓子的作用与其所含有的丰富活性物质密切相关。如胡颓子果实含有三萜类化合物－熊果酸、多糖、多种微量元素、维生素等等。近年来熊果酸的抗肿瘤作用日益受到重视。研究发现熊果酸可抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡、对抗致癌物如B(α)P，黄曲霉素B1诱发的基因突变,抑制TPA对二甲基苯并蒽(DMBA)诱导的小鼠皮肤癌的促癌作用,因而认为熊果酸具有抗突变、抗促癌作用［7～9］。本实验与张奕颖［7］等报道的熊果酸抑制胃癌细胞实验结果一致，说明胡颓子所含熊果酸具有抗肿瘤增殖作用。
   
　　胡颓子品种繁多，资源丰富,分布于全国各地。果实中富含人体所需的营养成分,是值得推广的药食两用植物。
   
　　致谢:医学院实验中心肖本见、李玉山在实验中给予大力协助,在此表示衷心感谢!

【参考文献】
  　　［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1983：6.

　　［2］ 朱 笃,徐 曲.胡颓子果实营养成分的测定［J］.江西师范大学学报(自然科学版),2000,24: 90.

　　［3］ 陈礼清,宫渊皮,邓玉林.胡颓子果实营养成分分析及加工利用初研［J］.四川林业科技，2000，21：28.

　　［4］ 黄泰康,丁志遵,赵守训，等.现代本草纲目［M］.北京:中国医药科技出版社,2001：1843.

　　［5］ 张贵君.现代中药材商品通鉴［M］.北京:中国中医药出版社,2001：1611.

　　［6］ 陈 新.川渝地区胡颓子属药用植物资源研究［J］.成都中医药大学学报，2001，24：40.

　　［7］ 张奕颖,邓涛,胡志芳，等.熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究［J］.中草药，2006，37：555.

　　［8］ 张维文，黎银燕，张贵平，等.熊果酸诱导人乳腺癌细胞 MCF27凋亡的实验研究［J］.中草药，2005，28：297.

　　［9］ Niikawa M,Hayashi H,Sato T,et al. Isolation of substances from glossy privet (Ligustrum lucidum Ait) inhibiting the muta2 genicity of benzo (α) pyrene in bacteria［J］. Mutat Res ，1993, 319：1.