复方黄酮胶囊的大鼠长期毒性实验研究

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   作者：潘洪平 危华玲 陈英

【摘要】  目的观察复方黄酮胶囊对大鼠长期毒性实验的影响。方法复方黄酮胶囊20.75，4.15 mg/kg（为临床日剂量的50倍和10倍）给大鼠连续灌服13周，停药2周，分别测量大鼠体重，计算脏器系数，测定血液学和血液生化学指标，并作组织病理学检查。结果复方黄酮胶囊高、低剂量组大鼠的外观体征、行为活动、体重，脏器系数，血液学和血液生化学指标，与空白对照组比较，均无明显差异；病理检查未见与药物毒性相关的明显病变，停药后也未见药物延迟性毒性反应。结论复方黄酮胶囊长期用药对大鼠无明显毒性，推论临床拟用剂量应是安全的。

【关键词】  复方黄酮胶囊 大鼠 长期毒性试验

　　Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Compound Flavone capsules on the rat chronic toxicity test.Methods 60 rats were randomly divided into 3 groups, each group was given Compound Flavone capsules intragastrically in dose of 20.75, 4.15 mg/kg (50 and 10 times of clinic dose) for 13 weeks. Half of the animals were killed immediately after the last dose, and another half of rats were observed for 2 weeks after medicine withdraw. Parameters examined included general condition, body weight, food intake, blood cell, blood biochemistry, organ index, and histopathological exmination.ResultsThe outer appearance and behavior, weights, organ coefficient, the indexes of haematology and biochemistry in rats had no significant difference by comparing with control group.The pathological examination did not discover significant pathological changes related to drug toxicity and the delayed toxicity reaction after drug administration. ConclusionCompound Flavone capsules have no significant toxicity for long-term administration on rats. It infers that the drawing up doses in clinic will be safe.

　　Key words：Compound Flavone capsules;  Rat;  Long-term toxicity
   
　　复方黄酮胶囊主要是由银杏叶提取物和山楂叶提取物等按一定的制剂工艺制成的复方中药新制剂，具有活血化淤等功效，主要用于治疗心脑血管疾病，效果良好。槲皮素为复方黄酮胶囊中的主要有效成分，具有保护心肌缺血缺氧、抗氧化、清除自由基、抗血小板聚集等作用［1,2］。为了进一步确保临床用药的安全性，本文对其进行了大鼠长期毒性实验。现报道如下。

　　1  材料

　　1.1  药物复方黄酮胶囊，含槲皮素 3.32 mg/粒,批号050508，由广西壮族自治区人民医院制剂室提供。使用时加蒸馏水配制成不同药物浓度供实验应用。

　　1.2  动物Wistar种大鼠，体重100～135 g，由广西医科大学动物实验中心提供，合格证：SCXK桂2003-0003。动物按性别分笼饲养于有空调的实验动物室内，室温（22±1）℃,相对湿度（60±5）℃。自由饮水和喂标准颗粒饲料。

　　1.3  仪器7170A型日立生化自动分析仪，日本东亚公司；NIHON KOHDEN 血细胞分析仪（日本产）（MEK-6318K）。

　　2  方法［3,4］
   
　　选取6～8周龄大鼠60只，体重(120±15) g，雌雄各半，随机分成3组，每组20只。 每组大鼠分笼饲养，每笼5只。设空白对照组，复方黄酮胶囊高剂量（20.75 mg/kg）和低剂量(4.15 mg/kg)组。给药各组分别以临床人日剂量的 50倍、10倍剂量的复方黄酮胶囊对大鼠灌胃给药，空白对照组给予等体积蒸馏水，1次/d，给药体积为1.0 ml/100 g体重,连续13周。每日观察记录大鼠一般状况如进食，行为活动，粪便等。称体重，1次/周，并及时调整用药剂量。末次给药24 h后，每组选取10只大鼠（雌雄各半），腹腔注射10%水合氯醛麻醉，从腹主动脉采血，采集的血样于血细胞分析仪上检测红细胞(RBC)、白细胞 (WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞系(LY)、单核细胞系(MO)、凝血时间（CT）等血液学指标。另外取血分离血清，于生化自动分析仪上测定血清中的总胆红素（T-Bil）、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、 谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、总胆固醇(T-Cho)、葡萄糖(GLU)等生化学指标。并对主要脏器进行全面尸检，取心、肝、脾、 肺、肾、肾上腺、胸腺等脏器称重，计算脏器系数。然后对上述主要脏器及胃、小肠、子宫、卵巢、睾丸、脑等脏器用10%甲醛固定，进行常规病理学检查。各组余下大鼠停药观察2周后，同法处理，并检测上述指标。所得结果作统计学处理，用t检验比较组间差异显著性。

　　3  结果

　　3.1  对动物一般情况的影响 在给药期间，复方黄酮胶囊各剂量组及空白对照组大鼠的外观体征、行为活动、进食量及粪便等状况正常，动物无一死亡。停药观察2周后，亦无明显变化。

　　3.2  对动物体重的影响连续用药13周和停药2周，复方黄酮胶囊高、低剂量组大鼠体重正常增长，与空白对照组比较，体重变化无明显差异。结果见表1。

　　3.3  对动物脏器系数的影响给大鼠连续用药13周和停药2周后，复方黄酮胶囊高、低剂量组和空白对照组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺等主要脏器系数比较，无明显差异（P＞0.05），表明给大鼠长期灌服复方黄酮胶囊，对大鼠主要脏器重量无明显影响。结果见表2～3。　3.4  对大鼠血液学指标的影响给大鼠连续用药13周，复方黄酮胶囊高、低剂量组和空白对照组大鼠血液的白细胞 (WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞系(LY)、单核细胞系(MO)、凝血时间（CT）等指标，与空白对照组比较, 除了高剂量组PLT值有所升高，低剂量组HGB值有所降低外，其他各剂量组的各项指标与空白对照组比较，均无显著性差异。停药14 d测定结果，除了高剂量组PLT值有所降低(其测定值在正常范围内)，其他各剂量组的各项指标与空白对照组比较，均无显著性差异。结果见表4～5。

　　表1  复方黄酮胶囊对大鼠体重增长的影响（略）

　　各剂量组与空白对照组比较均为P＞0.05

　　表2  复方黄酮胶囊用药13周后对大鼠主要脏器系数的影响（略）

　　各剂量组与空白对照组比较均为P＞0.05；n=10

　　表3  复方黄酮胶囊停药2周后对大鼠主要脏器系数的影响（略）

　　各剂量组与空白对照组比较均为P＞0.05；n=10

　　表4  复方黄酮胶囊用药13周后对大鼠血液学指标的影响（略）

　　各剂量组与空白对照组比较，*P＜0.05;n=10

　　表5  复方黄酮胶囊停药2周后对大鼠血液学指标的影响（略）

　　与空白对照组比较，**P＜0.01；n=10

　　3.5  对大鼠血液生化学指标的影响给大鼠连续用药13周，测定复方黄酮胶囊高、低剂量组和空白对照组大鼠在末次给药2 4小时后的血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮（BUN）、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU) 、总胆红素（T-BiL）、肌酐（Crea）、总胆固醇（T-Cho）的结果，高剂量组的BUN和TB值有所降低，但均在正常范围内，无实际意义，其余各剂量组的各项指标与对照组比较，均无显著性差异。停药14 d的测定结果，各剂量组的各项指标与对照组比较，均无显著性差异。结果见表6～7。

　　表6  复方黄酮胶囊用药13周后对大鼠血液生化学指标的影响（略）

　　与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=10

　　表7  复方黄酮胶囊停药2周后对大鼠血液生化学指标的影响（略）

　　与空白对照组比较，P＞0.05；n=10

　　3.6  病理学检查给大鼠连续用药13周和停药2周后，分别处死动物，剖取各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺等脏器，首先进行肉眼尸检，主要脏器外形、体积、色泽均属正常，无充血、肿胀、坏死等异常现象。然后，各脏器用10%甲醛溶液固定48 h后，按常规方法做病理切片，光镜下检查。结果表明，复方黄酮胶囊高、低剂量组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸、卵巢、子宫等脏器进行全面肉眼尸检，用药组和对照组均未见异常。病理组织学检查，大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸、卵巢、子宫、胃、小肠等脏器组织形态学均为正常，与空白对照组比较，未明显见到由于药物毒性引起的病理改变。因此，证明给大鼠长期灌胃复方黄酮胶囊对动物器官组织无影响。

　　4  讨论
   
　　有文献报道，给狗每天静注银杏叶黄酮2～8 mg·kg-1，其血常规和肝功能均未见异常。银杏叶黄酮对兔、豚鼠、大鼠、小鼠等动物的亚急性实验表明,其对心、肝、脾、肾、动脉等器官组织的影响均未见形态学改变［5］。
   
　　张杰等［6］研究发现，用银杏叶茶喂养大鼠30 d，其对致突变实验中各个检测指标均未发现有特异的改变，银杏叶上述试验的结果均为阴性，说明较长时间饮用银杏叶茶较为安全。
   
　　张政民等［7］实验证实，山楂叶提取物即使在高剂量组（5 mg/皿）亦未表现出致突变性，这表明山楂叶提取物具有一定的使用安全性。
   
　　上述文献报道表明，复方黄酮胶囊中的主要有效成分银杏叶提取物和山楂叶提取物的毒性均较低。
   
　　本实验结果表明，复方黄酮胶囊以20.75和4.15 mg/kg体重，相当于人临床日剂量( 0.42 mg/kg)的50和10倍剂量，连续给大鼠灌胃给药13周及停药2周，与空白对照组比较，动物的一般状况、体重、主要脏器系数无明显差异；血液学指标、血液生化学指标检查，各剂量组的大多数检测项目与空白对照组比较，虽有个别检测指标有一定差异，但其测定值仍在正常值范围内，故无实际意义。主要脏器的病理检查表明，组织形态学正常，未见与药物毒性相关的明显病变；停药2周后也未见药物延迟性毒性反应。表明复方黄酮胶囊毒性很小，临床拟用剂量应是安全的。

【参考文献】
  　　［1］ 林 蓉，刘俊田.槲皮素对缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用［J］.中国药理学通报，2003，19（4）：475.

　　［2］ 王艳芳，王新华，朱宇同.槲皮素药理作用研究进展［J］.天然产物研究与开发，2003，15（2）：171.

　　［3］ 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南［S］.大鼠的长期毒性试验，1993:205.

　　［4］ 中华人民共和国卫生部药政管理局.新药（西药）临床前研究指导原则汇编［S］.大鼠的长期毒性试验，1993:199.

　　［5］ 潘洪平. 银杏叶制剂药理作用和临床应用研究进展［J］.中国中药杂志，2005，30（2）：93.

　　［6］ 张 杰，陈世伟，王海玉，等. 银杏叶茶的毒理学研究［J］. 中国卫生检验杂志，1999，9（5）：391.

　　［7］ 张政民，史卫兵，朱安军. 银杏叶乙醇提取物致突变性实验［J］. 职业与健康，2003，19（6）：38.