高效液相色谱法测定心脑通口服液中丹酚酸B的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-17 22:44:36

【摘要】  目的采用高效液相色谱法测定心脑通口服液中丹酚酸B的含量。方法色谱柱为Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm,5 μm) ，甲醇0.5%冰乙酸（34∶66）为流动相，检测波长为286 nm。结果丹酚酸B在0.066 96～3.348μg范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为100.0%，RSD=2.43％。结论该法快速简便，精密度好，灵敏度高，可用于产品的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱法；丹酚酸B；心脑通口服液

　　Determination of Salvianolic Acid B in Xinnaotong Oral Liquor  by HPLC

　　Abstract：ObjectiveTo establish a method using HPLC for determination of  salvianolic acid B in  Xinnaotong oral liquid.MethodsThe analysis was performed on Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm,5 μm),mobile phase:methanol-0.5% acetic acid (34∶66),the detection wavelength was at 286 nm.ResultsThe linear range was 0.06696～3.348μg,(r=0.9999).The average recovery was 100.0% and RSD was 2.43％.ConclusionThe method is simple,rapid and accurate and can be used for quality control of  Xinnaotong oral liquid.

　　Key words：HPLC；  Salvianolic acid B；  Xinnaotong oral liquor

　　心脑通口服液收载于国家药品监督管理局标准（试行），是由杜仲、土木香、瓜蒌、丹参等8味中药组成，具活血健脾、化浊调脂之功效，用于高脂血症等［1］。原标准采用HPLC法测定杜仲中绿原酸的含量，由于丹参是方中主药，丹酚酸B为其主要活血、抗氧化的有效成分，所以选择丹酚酸B含量为定量指标。为了更有效控制制剂质量，增加HPLC的方法对方中丹酚酸B的含量进行测定。

　　1  仪器和试药

　　Agilent－1100高效液相色谱仪包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，二级管阵列检测器（DAD检测器）；超纯水器（Mililpore）；AS5150A超声波发生器（奥特赛恩斯仪器有限公司）。

　　对照品：丹酚酸B对照品（供含量测定用，中检所提供，批号: 11562－200402）。

　　样品：心脑通口服液为厦门天瞬制药有限公司提供（批号050503，050603，050607）以及阴性样品自制。

　　试剂：甲醇色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果［2］

　　2.1  色谱条件色谱柱为Hypersil  ODS2（5 μm,4.6 mm×250 mm）（大连依利特科学仪器公司）；柱温为室温；流动相为甲醇0.5%冰乙酸溶液（34∶66），流速1 ml/min；检测波长为286 nm；进样量10 μl。理论板数按丹酚酸B的峰计算应不低于3 000。并且与其它成峰分离良好。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取常温减压干燥12 h的丹酚酸B对照品10 mg，置10 ml量瓶中，加70％甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2 ml，置25 ml量瓶中，70％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.2.2  供试品溶液的制备  精密量取本品10 ml，置25 ml量瓶加70％甲醇至刻度，摇匀，即得。

　　2.2.3 阴性样品溶液的制备按处方项下取各味药材（缺丹参），按制法项下制作空白样品，并按正文方法制备阴性样品溶液。
　　测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定。实验结果表明：阴性样品溶液在与对照品相应的保留时间处，无峰出现，表明方中其余各味药对丹酚酸B色谱峰测定无干扰。结果见图1。
　　a丹酚酸B对照品(批号:11562-200402中检所提供)　b样品  c缺丹参阴性样品

　　图1  丹酚酸B对照品、心脑通口服液样品及阴性样品色谱图（略）

　　2.3  线性关系考察精密称取丹酚酸B对照品适量，加70%甲醇制成0.334 8 mg/ml的对照品贮备溶液，精密吸取上述贮备液0.2，0.5，1，5，10 ml于10 ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，即得不同浓度的对照品溶液，分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪中，测定峰面积，以峰面积（mAU）为纵坐标，相应的进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线,丹酚酸B回归方程为Y＝1 068.8X-9.1557，r＝0.999 9，表明丹酚酸B在0.066 96～3.348 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.4  稳定性实验取同一批号（050503）供试品溶液：分别于0，2，4，6，8，10，12 h进样，按上述色谱条件测定得丹酚酸B峰面积，求相对标准偏差RSD为1.39%，表明样品中的丹酚酸B在12 h内稳定。

　　2.5  重复性实验取心脑通口服液样品5份（批号：050503），按供试品溶液的制备方法制备样品供试液，进行含量测定，结果丹酚酸B平均含量为0.19 mg/ml，RSD=1.84%，表明重复性良好。

　　2.6  回收率实验  精密吸取已知含量的同一批号样品（批号：050503），采用加样回收试验，精密加入1 ml丹酚酸B对照品溶液（C＝1.128 8 mg/ml），按正文方法测定，并计算回收率。结果见表1。

　　表1  回收率实验结果（略）

　　实验结果表明，丹酚酸B得平均加样回收率在95％～105％之间，加样回收率良好。

　　2.7  样品测定分别对3批样品按上述方法含量测定方法进行测定。结果见表2。

　　表2  心脑通口服液3批样品含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　丹参有效成分,大致分脂溶性和水溶性两类。水溶性成分有增加冠脉流量、抗心肌缺氧、抗氧化等作用，水溶性成分中丹酚酸B的含量最高［3］。丹酚酸B又是本品中活血的主要有效成分，因此本实验采用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量来控制心脑通口服液的质量。

　　实验中曾采用：①甲醇乙腈水冰醋酸（40∶10∶50∶1）；②甲醇0.4％甲酸（10∶90）；③甲醇0.5％冰醋酸（34∶66）；④ 甲醇0.4%磷酸溶液（10∶90）流动相进行色谱分析，结果表明，在流动相③中分离效果良好，峰形较理想，故选择甲醇0.5%冰醋酸溶液（34∶66）为流动相。

　　方法学研究结果表明，该法操作简便，结果准确，重复性好，能够有效控制产品质量。

【参考文献】
  　　［1］国家药品监督管理局标准（试行）WS－5023（B－0023）－2002.

　　［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：52.

　　［3］杜冠华，张均田.丹参现代研究概况与进展［J］.医药导报，2004，23（6）：355.

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

[药学] 高效液相色谱法测定心脑通口服液中丹酚酸B的含量