高效液相色谱法测定更年乐胶囊中淫羊藿苷的含量

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【摘要】  目的建立更年乐胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，以C18色谱柱（5 μm，4.6mm×200 mm）；乙腈∶水（30∶70）为流动相；流速1.0 ml/min，检测波长270 nm。结果淫羊藿苷在0.204～0.816 μg范围内呈良好的线性关系，r=0.999 9。平均回收率为98.77%，RSD为1.58%。结论该方法简单、灵敏度高，可用于更年乐胶囊中淫羊藿苷的含量测定。
　　

【关键词】  更年乐胶囊； 淫羊藿苷； 高效液相色谱

　　Abstract：ObjectiveTo establish HPLC method for the determination of Icariine in Gengnianle Capsule. Methods LUNA ODS C18 BDS (200 mm×4.6 mm) was used with acetonitrile water (30∶70) as a mobile phase. The flow rate was 1.0 ml·min-1. The detecting wavelength was 270 nm. ResultsThe linear range of Icariine was 0.201～0.816 μg,r=0.999 9. The average recovery was 98.77%. Conclusion The method is simple,rapid and accurate.

　　Key words：Gengnianle Capsule;  Icariine;  HPLC
   
　　更年乐胶囊由淫羊藿、牡蛎、知母、金樱子、黄柏、车前子、人参等组成，具有养心养肾、调补冲任的功能。用于更年期出现的夜寐不安，心悸，耳鸣，多疑善感，烘热汗出，烦躁易怒，腰背酸痛等症。根据方中成分，选择其主药淫羊藿中的淫羊藿苷作为含量控制的指标，采用高效液相色谱法测定制剂中的淫羊藿苷。现报道如下。

　　1  仪器与试药
   
　　HP1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，HP化学工作站。色谱柱：LUNA ODS C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；超声提取器（AS3120B）。
   
　　淫羊藿苷对照品，购于中国药品生物制品检定所（含量测定用，批号0737-200011）。
   
　　乙腈、甲醇为色谱纯；水为亚沸重蒸水；所用其它试剂均为分析纯。更年乐胶囊，自制，批号041020；041022；041025。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱为LUNA ODS C18柱分析柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相［1］为乙腈∶水（30∶70）；检测波长270 nm；流速1.0 ml/min；进样量10 μl。在上述色谱条件下淫羊藿苷与其他成分分离良好，且空白溶液无干扰，见图1～3。

　　2.2  对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含淫羊藿苷50 μg的溶液，即得。

　　2.3  供试品溶液的制备［2］取本品内容物细粉（过80目筛）约2.0 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

　　2.4  空白溶液的制备按处方组成，取除淫羊藿外的其余药物，按制备工艺要求制成不含淫羊藿的空白对照样品，按供试品制备项下的方法制备空白溶液，分别吸取空白溶液与供试品10 μl注入液相色谱仪。结果表明，空白溶液与供试品比较，相应位置未出峰，认为无干扰。

　　图1  对照品的HPLC图（略）

　　图2  供试品的HPLC图（略）

　　2.5  线性关系考察精密称量淫羊藿苷标准品5.1 mg置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取对照品溶液4，6，8，12，16 μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积积分值（A）为纵坐标，淫羊藿苷进样量（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=4164.7C-29.352,r=0.999 9。表明淫羊藿苷在0.204～0.816 μg范围内呈良好的线性关系。　图3  空白样品的HPLC图（略）

　　2.6  精密度实验精密吸取淫羊藿苷对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积平均值为1 779，RSD为1.35%。

　　2.7  重复性实验按上述供试品溶液制备方法，称取同批号样品（批号041020）5份，分别进行测定。得淫羊藿苷的平均含量为0.33 mg/粒，RSD为1.36%。

　　2.8  稳定性实验取同一供试品溶液（批号041020），分别于配制后0，2，4，8，12 h依法测定，峰面积平均值为1522，RSD为2.28%，表明样品溶液在12 h内稳定。

　　2.9  回收率实验采取加样回收法（按1∶1加入），精密称取已知含量的同一批号样品（041020）1.0 g共5份，分别精密加入浓度为1.1 mg/ml的淫羊藿苷对照品溶液1 ml，水浴蒸干，混合均匀，按2.3项下方法制备供试品溶液，精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，同法测定。计算平均回收率为98.77%，RSD为1.58%（n=5）。结果见表1。

　　表1  淫羊藿苷回收率实验结果（略）

　　2.10  样品测定结果取3个批号(041020,041022,041025)的样品,每个批号3个样本,按样品溶液制备项下的方法提取，结果3个批号样品的淫羊藿苷平均含量分别是0.33,0.29,0.33 mg/粒。

　　3  讨论

　　3.1  流动相的选报参考文献［1，2］分别选择甲醇∶水（62∶38）、甲醇∶0.1 mol/L磷酸二氢钠水（52∶48）、乙腈∶水（30∶70）作为流动相进行实验，结果发现以乙腈∶水（30∶70）为流动相时，被测物分离效果较好，杂质干扰少，故选择其为本法的流动相。

　　3.2  样品制备方法曾采用70%乙醇加热回流提取及50%乙醇超声提取，结果发现50%乙醇超声提取所得杂质较少，被测成分分离效果好，且操作简便，快捷，故选择本法。
   
　　实验证明，该含量测定方法简单可靠，易于操作，重现性好，可作为本品的质量控制的有效方法。

【参考文献】
  　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：545.

　　［2］ 苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术［M］.北京：人民卫生出版社，2000：971.