麻黄果多糖对家兔心室乳头肌电活动的影响

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【摘要】  目的观察麻黄果多糖对家兔离体心室乳头肌动作电位的影响，并探讨其作用机制。方法采用玻璃微电极细胞内纪录方法，描记麻黄果多糖对心室乳头肌静息电位（RP），动作电位幅值（APA），0相最大除极速度(Vmax)、复极至50%和90%(APD50，APD90)的时间的影响，并利用M受体阻断剂和β受体阻断剂，探讨其作用靶点。结果麻黄过多糖灌流5 min时，APD，APD50，APD90均明显延长，后逐渐缩短；10 min时，该3项指标与对照组相比显著缩短。应用M受体阻断剂后，该效应消失；应用β受体阻断剂时，先延长后缩短的效应仍存在。结论 麻黄果多糖作用于心室乳头肌M受体，对K+通道有先抑制后易化的双向效应。

【关键词】  麻黄果多糖 心室乳头肌 动作电位

　　Effect of Ephedra vulgans Fruit Polysaccharide (EVFP) on Electric Potential of Ventricular Papillary Muscle in Rabbits

　　AbstractObjectiveTo observe the effects and the mechanism of EVFP on electric potential of ventricular papillary muscle in rabbits. MethodsThe electric potentials of isolated ventricular papillary muscle were intracellularly recorded. Electrophysiological parameters were: resting potential (RP), amplitude of action potential (APA), maximal rate of depolarization of phase 0 (Vmax), duration of action potential (APD), duration of 50% and 90% depolarization (APD50 and APD90). The effects and mechanisms of action EVFP on the electric potentials were observed. ResultsWhen 120 μmol EVFP had been reperfused for 5 min, the APD, APD50, and APD90 were prolonged, and then they were shorten gradually.Compared with the controt group,the three indexes were obviously shortened when EVFP reperfused for 10 min. These effects disappeared when block agent of M-receptor was used before EVFP reperfusion. But these effects existed when block agent of β-receptor was used before EVFP reperfusion.ConclusionAPD, APD50 and APD90 of ventricular papillary muscle were prolonged by EVFP. The effect may be related to M-receptor.

　　Key wordsEphedra vulgans fruit polysaccharide;  Ventricular papillary muscle;  Electric potential

    麻黄为麻黄科植物，具有发汗解表、宣肺平喘、利尿消肿等功效。麻黄果多糖是麻黄果实中的主要有效成分之一，可以通过内、外源两条途径发挥其抗凝的效应，也可作用于心肌的M受体，有明显的降压作用。本文观察麻黄果多糖对家兔离体心室乳头肌动作电位的影响，探讨其作用机制，为麻黄果多糖在临床的应用提供理论依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  药物提取称取麻黄及其果实各4 g，分置圆底烧瓶中，加35 ml水回流煮沸2 h，过滤，残渣用水再回流两次，20 ml/次，合并滤液，过DA101大孔树脂柱脱色，接收液中加入5%ZnSO4溶液和饱和Ba(OH)2溶液适量以沉淀蛋白质，振摇，静置，取上清液滴加Ba(OH)2直至无沉淀产生，过滤至100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度［1］。

　　1.2  标本制备家兔15只，雌雄不拘，体重（2.0±0.5）kg。击头至昏，速取心脏，置于O2饱和的Lock液中，冠脉冲洗后，剪开右心室，取其乳头肌。将乳头肌固定于灌流槽内的硅橡胶上, 用改良的Locke液以10 ml/min进行恒速灌流, 温度维持在（36±1）℃, 灌流液中充以纯O2, pH 7.4。 标本在灌流液中稳定30 min后开始实验。

　　1.3  电位引导玻璃微电极直流电阻为10～20 MΩ。给予波宽2 ms、1　Hz、二倍于阈强度的方波刺激,电位稳定后开始实验。动作电位经DWF-3型微电极放大器放大后, 一路输入SBR-1型示波器进行观察, 一路输入监听器监听, 另一路经高速模数转换器输入微机, 自动显示电信号, 并分析动作电位的各项参数指标。
　
　　1.4  观测指标静息电位(resting potential, RP)、动作电位幅值(amplitude of action potential, APA)、0相最大除极速度(maximal rate of depolarization, Vmax)、动作电位时程（duration of action potential, APD）、复极至50%和90%时间(duration of 50% and 90% repolarization, APD50 and APD90).

　　1.5  实验过程待动作电位稳定后，采集一组正常的动作电位为对照，然后改用其它灌流液灌流，分别记录5 min和10 min动作电位变化，最后用新 Lock液冲洗，观察动作电位恢复过程。　　1.6  分组①单纯麻黄果多糖灌流组（麻黄果多糖组）；②单纯10 μmol/L乙酰胆碱灌组（Ach组）；③M受体阻断剂阿托品+麻黄果多糖组（阿托品+麻黄果多糖组）（先描记一组正常动作电位后，用 10μmol/L阿托品灌流5min后，用麻黄果多糖灌流）；④β受体阻断剂液噻吗心安+麻黄果多糖组（噻吗心安+麻黄果多糖组）（描记一组正常动作电位后，用 10 μmol/L噻吗心安灌流5min后，用麻黄果多糖灌流）。

　　1.7  统计学处理应用Excel统计工具进行, 动作电位的各观测指标均以±s表示, 给因素前后各项指标用t检验, 以P<0.05为有显著差异。

　　2  结果

　　2.1  麻黄果多糖对心室乳头肌动作电位的影响120 μmol/l麻黄果多糖灌流5 min时，APD，APD50及APD90明显延长，与对照组有明显差异。随后灌流6～7 min开始逐渐缩短，10 min时趋于稳定，APD，APD50及APD90均明显短于正常对照组，随后无明显变化。其余各观测指标无明显变化。冲洗10 min后恢复至正常水平。结果见表1。表1  麻黄果多糖对家兔心室乳头肌动作电位的影响（略）

　　2.2  乙酰胆碱对心室乳头肌动作电位的影响10 μmol/L Ach灌流5 min时，动作电位APD， APD50及APD90均明显缩短，后无明显变化，直至灌流10 min时。冲洗10 min后恢复至正常水平。结果见表2。表2  乙酰胆碱对家兔心室乳头肌动作电位的影响(略)

　　2.3  阿托品+麻黄果多糖对心室乳头肌动作电位的影响10 μmol/L的阿托品灌流5 min时，动作电位各指标无明显改变。用120 μmol/L麻黄果多糖灌流5  min时动作电位各指标与正常对照相比无明显改变，10 min时仍稳定于同一水平。冲洗10 min后仍无明显改变。结果见表3。表3  阿托品+麻黄果多糖对家兔心室乳头肌动作电位的影响(略)

　　2.4  噻吗心安+麻黄果多糖对心室乳头肌动作电位的影响10 μmol/l噻吗心安灌流5 min时，动作电位各指标无明显改变。用120 μmol/l麻黄果多糖灌流5  min时，APD，APD50及APD90明显延长，与正常对照组相比有显著差异。随后灌流6～7 min后开始逐渐缩短，10 min时趋于稳定，APD，APD50及APD90均明显短于正常对照组，随后无明显变化。其余各观测指标无明显改变。冲洗10 min后恢复至正常水平。结果见表4。表4  噻吗心安+麻黄果多糖对家兔心室乳头肌动作电位的影响(略)

　　3  讨论

    植物多糖的生物活性已越来越多地引起人们的关注，其在抗凝、降血糖、增强免疫力等方面已有较多研究［2～4］。麻黄果多糖是中药麻黄果实中的主要有效成分之一，其也可以通过内、外源两条途径发挥其抗凝的效应［5］，我们在整体家兔的研究还发现，其可作用于心肌的M受体，有明显的降压作用［6］。

    本实验中，单纯麻黄果多糖灌流5 min时，动作电位时程明显延长，APD50及APD90均延长，表明复极期K+外流减弱；6～7min时出现相反结果，动作电位时程明显缩短；APD50及APD90均缩短，10 min时稳定于APD缩短水平，表明复极期K+外流增强。应用M受体阻断剂阿托品灌流后，再用同样浓度麻黄果多糖灌流，却无上述现象发生，说明麻黄果多糖对心肌电活动的这种效应作用于M受体而产生的。应用β受体阻断剂噻吗心安灌流后，再用麻黄果多糖灌流5 min时和10 min时动作电位时程的表现与单纯应用麻黄果多糖时相似，表明麻黄果多糖作用于M受体后，其效应不完全与乙酰胆碱效应相同，对K+外流有先抑制，后易化的双向效应，由于开始时的抑制效应较短，而较强的易化效应使K+外流加速，动作电位时程缩短，使心肌细胞兴奋性、传导性下降，由于K+外流加速，可抑制心肌细胞膜对Ca2+通透性，使Ca2+内流减少，从而降低心肌收缩力，这也与我们以前整体实验中降压作用的机制一致［7］。

    综上所述，麻黄果多糖可作用于离体心室乳头肌M受体，对K+离子通道有先抑制后易化的双重效应，从而影响了心肌的电活动。

【参考文献】
  　　［1］王书华，李如章，曹淑萍，等. 麻黄果实糖含量的测定［J］.张家口医学院学报，1999，16（2）：23.

　　［2］戴国华,张彤,林慧娟.高血压现代中医治疗思路与方法［J］.中医药信息,2004,21：47.

　　［3］韩果萍,段玉峰.我国天然活性多糖药理研究进展［J］.中药材,2003,26：138.

　　［4］赵帜平,沈业寿.丹皮多糖分离纯化和降血糖作用研究［J］.安徽大学学报(自然科学版),1999,23：90.

　　［5］邱丽颖，王书华，吕 莉，等.麻黄果多糖的抗凝血机制研究［J］.张家口医学院学报，1999，16（1）：3.

　　［6］邱丽颖，王书华，吕 莉，等.麻黄果多糖对家兔动脉血压的影响机制研究［J］.张家口医学院学报，1999，16（2）：1.

　　［7］王书华，安 芳，邱丽颖，等. 麻黄果实的多糖研究［J］.中国中药杂志，1999（增刊）：65.