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【摘要】 目的建立妇月康胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法采用HPLC法，uBondapak C18(4.0 mm×250 mm)柱，甲醇5%冰醋酸溶液（22∶78）为流动相，检测波长322 nm。结果阿魏酸在 0.072 5～0.290 0 μg范围内浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.999 9 (n=5)。平均回收率99.46%，RSD 为1.26%。结论 该法简便、灵敏、准确，可用于妇月康胶囊的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法 妇月康胶囊 阿魏酸
Determination of Ferulic Acid in Fuyuekang Capsule
Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of ferulic acid in Fuyuekang Capsules. MethodsHPLC method was used in the quantitative analysis using a uBondapak C18(4.0 mm×250 mm) column. The mobile phase was methyl alcohol-5% glacial acetic acid (22∶78) and detecting wavelength was 322 nm. ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.0725～0.2900 μg for ferulic acid (r=0.999 9,n=5). The average recovery was 99.46% and RSD was 1.26%. ConclusionThis method is simple, sensitive, accurate and available for the quality control of Fuyuekang Capsules.
Key words：HPLC； Fuyuekang Capsule； Ferulic acid
妇月康胶囊是由当归、川芎、甘草（炙）、干姜（炭）、益母草、等8味中药组成，其主要功能为活血、祛淤、止痛。用于产后恶露不行，少腹疼痛，也可试用上节育环后引起的阴道流血，月经过多。当归为本方的君药之一，且当归、川芎的有效成分均为阿魏酸。故选择阿魏酸作为控制该产品质量的定量指标，通过高效液相色谱法建立其含量测定方法。
1 仪器与试药
Model 2000二元高压梯度高效液相色谱系统（美国SSI公司），包括Model 500型紫外/可见可变波长检测器，Laballiance Instrument Series Ⅳ Pump，阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用 批号07739809），妇月康胶囊（自制），水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，冰醋酸等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：uBondapak C18(4.0 mm×250 mm)；流动相：甲醇5%冰醋酸溶液（22∶78）；检测波长：322 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃；进样量：10 μl。
2.2 对照品溶液的制备
取阿魏酸对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升含阿魏酸14.5 μg的溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物约4.0 g，精密称定，加甲醇甲酸（95∶5）溶液40 ml，超声处理30 min，放冷，滤过，用少量甲醇甲酸（95∶5）溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤过，合并滤液，70℃水浴上蒸干，残渣加30 ml水溶解，加盐酸调节pH值至2～3，用乙醚提取5次，30 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解，移置10 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取阿魏酸对照品溶液5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，20.0 μl进样，按上述色谱条件测定，以对照品量（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得阿魏酸回归方程：Y=3 317 067X＋11 069.7（r=0.999 9）。阿魏酸在0.072 5～0.290 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.5 精密度实验
精密吸取阿魏酸对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定峰面积值，RSD=1.43%，小于2%。
2.6 重现性实验取同一批号的样品5份，分别按上述方法测定含量。结果见表1。表1 重现性实验结果（略）
2.7 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液,分别于0，1，2，4，8 h后进样10 μl，测定阿魏酸峰面积，结果表明,供试品溶液在8 h内稳定性良好, RSD为1.15%。
2.8 阴性对照实验
按照本品处方，取当归、川芎外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含当归、川芎的胶囊内容物，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液并测定。阴性溶液色谱中，与对照品相应的位置上无干扰，见图1。
2.9 回收率实验精密称取已知含量的样品5份，分别精密加入等量的阿魏酸对照品，按供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表2。表2 回收率测定结果（略）
2.10 样品测定依法测定样品4批次。结果见表3。表3 样品测定结果（略）
3 讨论［1，2］
本实验经对阿魏酸对照品溶液进行紫外扫描发现,在322 nm处有最大吸收,故选择322 nm作为测定波长。通过对乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）、乙腈-2%冰醋酸（20∶80）、甲醇-5%冰醋酸(25∶85)等多种流动相进行比较实验,发现甲醇-5%冰醋酸溶液(22∶78)的系统分离效果最好,且柱效高,故选择本系统为流动相。制备供试品溶液选择提取溶媒时，曾对甲醇、甲醇-甲酸（95∶5）、醋酸乙酯和水进行了比较，其中用水提取，在乙醚萃取时乳化现象严重，干扰测定。其余三种则以甲醇-甲酸（95∶5）提取效率最高,故提取溶剂选择甲醇-甲酸（95∶5）溶液。但甲醇-甲酸（95∶5）提取液颜色较深干扰测定，故本研究在此基础上，结合阿魏酸的理化性质，又进行初步纯化，用乙醚萃取。对萃取次数及超声提取20～40 min的结果进行比较,结果表明,超声30 min, 萃取5次，阿魏酸即可提取完全。
实验结果表明：本法简便、灵敏、准确，可用于妇月康胶囊的质量控制。
【参考文献】
［1］苗明三, 李振国. 现代实用中药质量控制技术［M］.北京：人民卫生出版社,2000：131， 412.
［2］薛玉梅. HPLC法测定新生化颗粒中阿魏酸的含量［J］.基层中药杂志，2002，16（4）：26. 2.5 精密度实验
精密吸取阿魏酸对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定峰面积值，RSD=1.43%，小于2%。
2.6 重现性实验取同一批号的样品5份，分别按上述方法测定含量。结果见表1。表1 重现性实验结果（略）
2.7 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液,分别于0，1，2，4，8 h后进样10 μl，测定阿魏酸峰面积，结果表明,供试品溶液在8 h内稳定性良好, RSD为1.15%。
2.8 阴性对照实验
按照本品处方，取当归、川芎外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含当归、川芎的胶囊内容物，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液并测定。阴性溶液色谱中，与对照品相应的位置上无干扰，见图1。
2.9 回收率实验精密称取已知含量的样品5份，分别精密加入等量的阿魏酸对照品，按供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表2。表2 回收率测定结果（略）
2.10 样品测定依法测定样品4批次。结果见表3。表3 样品测定结果（略）
3 讨论［1，2］
本实验经对阿魏酸对照品溶液进行紫外扫描发现,在322 nm处有最大吸收,故选择322 nm作为测定波长。通过对乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）、乙腈-2%冰醋酸（20∶80）、甲醇-5%冰醋酸(25∶85)等多种流动相进行比较实验,发现甲醇-5%冰醋酸溶液(22∶78)的系统分离效果最好,且柱效高,故选择本系统为流动相。制备供试品溶液选择提取溶媒时，曾对甲醇、甲醇-甲酸（95∶5）、醋酸乙酯和水进行了比较，其中用水提取，在乙醚萃取时乳化现象严重，干扰测定。其余三种则以甲醇-甲酸（95∶5）提取效率最高,故提取溶剂选择甲醇-甲酸（95∶5）溶液。但甲醇-甲酸（95∶5）提取液颜色较深干扰测定，故本研究在此基础上，结合阿魏酸的理化性质，又进行初步纯化，用乙醚萃取。对萃取次数及超声提取20～40 min的结果进行比较,结果表明,超声30 min, 萃取5次，阿魏酸即可提取完全。
实验结果表明：本法简便、灵敏、准确，可用于妇月康胶囊的质量控制。
【参考文献】
［1］苗明三, 李振国. 现代实用中药质量控制技术［M］.北京：人民卫生出版社,2000：131， 412.
［2］薛玉梅. HPLC法测定新生化颗粒中阿魏酸的含量［J］.基层中药杂志，2002，16（4）：26. |
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发表于 2014-8-17 19:23:03
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