大黄治疗慢性肾功能衰竭有效成分研究

amy54321 · 发表于 2014-8-17 19:22:15

【摘要】  目的对药用大黄治疗慢性肾功能衰竭的化学成分进行研究。方法应用色谱和光谱技术提取分离和鉴定大黄中化学成分（-）epigallocatechin3ogallate（EGCG），并通过口服给予对肾切除致肾衰鼠模型治疗，观察各组动物尿素氮和血肌酐含量。结果EGCG能减低肾衰鼠模型血中尿素氮和血清肌酐水平、降低肾小球膜损伤指数，且与药剂量呈一定量效关系。结论药用大黄中化学成分EGCG能使肾的组织结构和生理功能接近正常。

【关键词】  大黄肾衰竭化学成分

　　Study on the Chemical Constituent of Rhubarb in the Treatment of Chronic Renal Failure

　　Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituent of rhubarb in the treatment of chronic renal failure .MethodsChromatographic and spectral technologies were used to extract ,separate and elucidate the chemical constituent EGCG.Treat the kidney in the mouse model through giving orally,observes each group of animal urea nitrogen and the serum myoanhydride content.ResultsThe level of urea nitrogen in the blood and serum myoanhydride decrease.EGCG reducd the renal glomerulus's membrane damage index.ConclusionThe chemical constituent EGCG of rhubarb can protect and repair the kidney organic function .

　　Key words：Medical rhubarb;  Kidney failure;  Chemical compostion

慢性肾功能衰竭（Chronic Renal Failure,CRF）是多种肾脏疾病持续进展的最终结局，而阻止其进展仍然是目前临床医生和病人最为关注的问题之一。对CRF治疗主要包括肾脏替代治疗和非替代治疗。目前常用透析治疗法只能延长寿命而不能从根本上改善肾脏功能；肾移植存在费用较高，供源紧张且有排异及并发症等问题。中药大黄及其复方制剂在临床上已广泛应用于CRF的治疗［1］。它对抑制CRF发展有确切效果［2，3］。据相关文献报道［4～6］，大黄中抑制CRF的有效成分主要是（）表没食子酰儿茶素3o没食子酸酯（）epigallocatechin3ogallate）（EGCG）。本文围绕EGCG的提取分离、结构鉴定和抑制CRF的初步药理实验进行研究，以其为治疗慢性肾功能衰竭的中药新药研究提供依据。

　　1  仪器与材料

XRC1型显微熔点测定仪（温度未校正）；IR440型红外光谱仪；VarianINOVA600型核磁共振仪（TMS内标）；薄层色谱硅胶和柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂生产）；Sephadex LH20凝胶（Pharmacia公司生产）；其它试剂均为分析纯。EGCG标准品购自SIGMA公司；大黄购自湖北利川药材公司，由湖北中医学院陈科力教授鉴定为Rheum officinale Baill。Wistar 纯种大鼠，普通级，由湖北中医学院提供。EGCG，按文后所述方法提取制备。

　　2  方法与结果

　　2.1  EGCG的提取分离与鉴定

　　2.1.1  提取分离干燥大黄粗粉用20倍量95%乙醇室温渗漉，提取液减压挥尽溶剂得浸膏，以4倍量水分散使混悬，再用等量醋酸乙酯萃取5次，减压回收溶剂得到膏状物。再用水相分散后，氯仿萃取5次，水层经反复硅胶层析，以氯仿甲醇梯度洗脱及Sephadex LH20柱层析，以水甲醇梯度洗脱得到化合物EGCG。

　　2.1.2  结构鉴定化合物EGCG：浅黄色粉末，mp218℃。易溶于水、甲醇等极性溶剂。FeCl3反应显蓝色，与对照品EGCG共薄层，甲苯∶醋酸乙酯∶甲酸（5∶4∶1）展开Rf值一致。1HNMR（Acetoned6）δ：2.95（1H，d,C4eH）,3.02(1H,d,C4aH)，5.10(1H,d,C2H),5.49(1H,t ,,C3H),6.01(1H,s,C8H),6.03(1H,s,C6H),6.60(2H,s,C2'H,C6’H)，7.01（2H,s,C2’’H,C6''H）。13CNMR（Acetoned6）δ：25.97(C4)，68.66(C3),77.39(C2),95(C8),95.8(C6),98.2(C10)，106(C2’，C8’)，109.2(C2’’，C6’’)，121.1（C1’’），130（C1’），132.5(C4’)，138.1(C4’’)，145.1(C3’’，C5’’)，145.5(C3’，C5’)，156（C5，C7），157（C9），165.4(C7’’)。

　　以上数据与文献报道［7，8］的波谱数据一致，故鉴定该粉末为EGCG。

　　2.2  EGCG的药理实验取健康雄性大鼠20只，腹腔注射2.5%戊巴比妥麻醉。沿腹线正中线切开腹壁，做右肾全切除，再切去左肾大部分［9］，残留左肾经止血处理后，缝合伤口，分笼饲养。术后每隔10 d割尾巴取血测定尿素氮，至血中尿素氮达62 mg时，表示肾功能已衰竭。抽签决定分组，对照组每只喂水10 ml/d；治疗组Ⅰ每只喂EGCG10 mg/d；治疗组Ⅱ每只喂EGCG 20 mg/d。　　2.2.1  EGCG对血尿素氮的影响见表1。表1  EGCG对肾衰鼠模型血尿素氮的影响(略)

　　2.2.2  EGCG对血清肌酐的影响见表2。表2  EGCG对肾衰鼠模型血清肌酐的影响(略)

由表1可以看出，随着实验时间的延长，对照组尿素氮水平逐渐升高；而两个治疗组则逐渐降低，至20 d时即有显著性差别。

由表2可以看出，随着实验时间延长，3个组血清肌酐水平都在升高，但是与对照品比较，到20 d时两个治疗组血清肌酐水平已有显著性差异，特别在末期对照组大鼠已明显出现尿毒症症状时，治疗组仍然维持较低水平。

　　2.2.3  组织病理学观察见表3。表3  组织病理学观察(略)

正常大鼠的系膜细胞分布在基底膜未包裹的毛细血管之间，附着在血管壁上，其生理功能是给毛细血管起支持作用，对肾小球毛细血管壁中滤过时残留下来的物质有清除作用。肾衰大鼠系膜细胞胞浆肿胀，滤过率低，通过毛细血管壁残留下来的物质多，需要系膜细胞清除的物质也多，细胞内清除的颗粒大而多，因而引起系膜细胞损伤也大，基质呈现增生和纤维化；而治疗组则经毛细血管滤过而残留下来的物质较少，故系膜细胞内清除的物质颗粒也小而少，又因清除负荷轻，引起系膜细胞基质增生和纤维化也轻。

　　3  讨论

氮代谢紊乱是CRF患者的突出表现，大量实验和临床研究均证明，大黄具有改善氮代谢作用［10］。以上实验初步做了EGCG对血清肌酐和尿素氮影响的药理实验，证实其能减少血肌酐和尿素氮的水平。

肾小球内系膜细胞增生和细胞外基质增多是肾小球硬化［11］过程中的主要表现，系膜细胞属于血管周细胞，是反应活跃的肾小球固有细胞，在炎症过程中不但是被动受害者，而且是直接参与者，通过其结构和代谢的改变直接影响炎症过程，以上实验证实，EGCG有保护和修复肾组织作用，减低血中尿素氮，降低血清肌酐，使肾脏滤过和排泄代谢产物的功能接近正常，减少废物在体内的潴留；废物在体内的潴留减少反过来对肾细胞的毒害和破损减轻，从而使肾组织结构和生理功能接近正常。

【参考文献】
  　　［1］肖炜，邓虹珠，马云，等.大黄治疗慢性肾功能衰竭的临床与实验研究概述［J］.中国中药杂志，2002，27（4）：241.

　　［2］黎磊石，刘志红，张景红，等.大黄延缓慢性肾衰竭的临床和实验研究［J］.中国中西医结合杂志，1991，11（7）：392.

　　［3］张景红，黎磊石，万柏珍，等.大黄对慢性肾衰病人脂质代谢的影响［J］.中华肾脏病杂志，1993，9（3）：133.

　　［4］Yokozawa T，et al,Nephron,1991，58：155.

　　［5］Yokozawa T,et al.Jpn.Nephron.1993,35(1)：13.

　　［6］Exp,Toxicol patrol,1997,49(1-2)：117.

　　［7］贾志胜，周波，杨立，等.绿茶中茶多酚的2D-NMR研究［J］.波谱学杂志，1998，15（1）：23.

　　［8］Shen CC.chang Y S,HOLK.Phytochem,1993,34：843.

　　［9］杨俊伟，黎磊石.大黄延缓慢性肾衰发展的实验研究［J］.中华肾病杂志，1993，9（2）：65.

　　［10］黎磊石.大黄治疗慢性肾功能衰竭的疗效及其作用机理［J］.临床内科杂志，1991，8（6）：12.

　　［11］蒋工伟，陈香美，黎磊石.大黄对体外肾小球系膜细胞生长的影响［J］.中华肾病杂志，1990，2（4）：37.

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