高效液相色谱法测定复方黄酮胶囊中熊果酸的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-19 22:01:21

【摘要】  目的建立复方黄酮胶囊中熊果酸的含量测定方法。方法高效液相色谱法，C18柱，以甲醇∶水∶磷酸（90∶10∶0.03）为流动相，流速为0.5 ml/min，检测波长为220 nm。结果熊果酸在0.982～9.82 μg /ml范围内与峰面积线性关系良好，相关系数为0.999 8，平均回收率为98.32%，RSD为0.56%（n=6）。结论该方法简便，准确，重现性好，适用于复方黄酮胶囊的质量控制。

【关键词】  复方黄酮胶囊熊果酸高效液相色谱法含量测定

　　Determination of Ursolic Acid in Compound Flavone Capsule by HPLC

　　Abstract：ObjectiveTo establish the method for determining the content of ursolic acid in Compound Flavone Capsules .MethodsThe C18 column with methanol- water- phosphorous acid (90∶10∶0.03) as the mobile phase was used. The flow rate was 0.5 ml/min and the detective wavelength was 220 nm . ResultsThe linear range of calibration curve was 0.982～9.82 μg/ml (r = 0.999 8). The average recovery was 98.32% and the RSD was 0.56% (n= 6).ConclusionThe method is simple and accurate with a good reproducibility. It can be used for the quality control of Compound Flavone Capsules.

　　Key words：Compound Flavone Capsules; Ursolic acid ；  HPLC；  Determination

复方黄酮胶囊为银杏叶提取物和山楂叶提取物的复方制剂，可用于治疗心脑血管疾病，效果良好。此黄酮类制剂多以总黄酮作为质量控制指标，已报道的测定方法主要有络合－比色法，此法易受杂质干扰，定量误差较大。熊果酸为山楂叶提取物的主要成分，本实验采用高效液相色谱法测定复方黄酮胶囊中熊果酸的含量，以进一步完善该制剂的质量标准。结果表明此方法操作简单、准确、重现性好。

　　1  仪器与试药

Waters600E型高效液相色谱仪，Waters996型PDA二极管阵列检测器，WatersM32色谱工作站(美国)。METTLER AE-240型电子天平（瑞士）；熊果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其余为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱：NovaPak C18柱（4.0 mm×250 mm，4 μm）；流动相：甲醇∶水∶磷酸（90∶10∶0.03）；检测波长220 nm；柱温35℃；流速为0.5 ml/min。在此条件下熊果酸峰与杂质峰能得到较好分离。见图1～2。

检测波长的选择：在三维图谱上查看熊果酸对照品的紫外吸收，并综合考虑检测波长的稳定性，选择其测定波长为220 nm。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液制备　精密称取熊果酸对照品约1 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

　　2.2.2  供试品溶液制备取样品胶囊20粒，倾出内容物，研细，精密称取平均粒重约0.25 g，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理(150 W，50 kHz)30 min，取出，放冷。用甲醇补足减失的重量，摇匀。离心(1 200 r/min)10 min，取上清液作为供试品溶液。

　　2.3  线性关系考察精密吸取熊果酸对照品储备液（0.982 mg/ml）1，2，4，6，8，10 ml分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密吸取上述溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积Y。以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并以最小二乘法计算，得回归方程Y＝3 665 512X－122 141，r＝0.999 8。结果表明熊果酸在0.982～9.82 μg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系。

　　2.4  精密度实验取供试品溶液，按以上色谱条件重复进样6次，测定峰面积，结果RSD为 0.36%(n＝6)。

　2.5  稳定性实验取供试品溶液，按以上色谱条件每隔一定时间进样 1 次，测定峰面积，结果RSD为0.68%，显示供试品溶液至少在 48 h内稳定。　　2.6  重现性实验精密称取同一批号（20060109）样品6 份，按

　　2.2.2项下方法操作，测定峰面积并计算熊果酸含量，结果熊果酸的平均含量为2.35 mg/粒，RSD=2.1%(n＝6)。

　　2.7  空白实验取不含主药的各种辅料，按制备工艺制得不含主药的空白试样。取相当于平均粒重的空白试样，按2.2.2项所述方法操作，对空白样品进行测定，结果表明，在对照品相应位置无干扰。

　　2.8  回收率实验精密称取已知含量样品（20060109）6 份，精密加入熊果酸对照品适量，按“2.2.2”项下方法操作，测得峰面积并计算含量。结果显示，平均回收率为98.32%，RSD=0.56%（n＝6)。

　　2.9  样品测定　

　　取本品3批，按“2.2.2”项下方法操作，并按上述色谱条件，吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定含量，结果每粒胶囊含熊果酸分别为2. 35，2.32，2.38 mg。

　　3  讨论

复方黄酮胶囊为银杏叶提取物和山楂叶提取物的复方制剂，熊果酸为山楂提取物的主要成分。熊果酸的含量测定采用HPLC法［2～4］，专属性强，因此，文中建立了HPLC法测定复方黄酮胶囊中熊果酸含量的方法，以进一步完善该制剂的质量标准。

在三维图谱上查看熊果酸对照品的光谱扫描图，208 nm处有最大吸收，但考虑到波长(208 nm)接近末端吸收，而且溶剂甲醇截止吸收波长为205 nm，从检测波长的稳定性方面考虑，为了减小溶剂的短波吸收干扰，选择220 nm为检测波长。在此检测波长下对照品和样品都能得到较好的光谱图。

分离条件的选择曾先后试验甲醇水(85∶5)、甲醇水冰醋酸(85∶15∶0. 04)等流动相系统，结果分离效果不好。水的比例调高时熊果酸色谱峰已严重变形成为馒头峰。采用本文中的流动相，熊果酸色谱峰峰形良好，并且柱效高，阴性对照无干扰，经用二极管阵列检测器分析，得到熊果酸对照品及供试品中熊果酸的色谱图及光谱图，其光谱吸收相同，峰纯度良好。

对3批样品测定：每粒胶囊的熊果酸含量均在2 mg以上，故本品的含量测定限度拟定为2 mg/粒以上。

【参考文献】
  　　［1］张妍，李厚伟，张永春，等.山楂中总黄酮几种提取分离方法的考察及含量测定［J］.哈尔滨医科大学学报，2001，35（3）：183.

　　［2］姬生国，王东，付蕾，等. 健胃口服液中熊果酸的含量测定［J］.时珍国医国药，2006，17（4）：566.

　　［3］刘安南.高效液相色谱法测定脂平胶囊中熊果酸含量［J］.时珍国医国药，2001，12（1）：34.

　　［4］袁珂,杨中汉. 车前草中熊果酸的超声提取及高效液相色谱法测定［J］.时珍国医国药，2006，17（12）：2466.

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

[药学] 高效液相色谱法测定复方黄酮胶囊中熊果酸的含量