痛必定注射液是由4种中药(有效成分或部位)组成的具有良好镇痛作用的中成药。其动物实验和临床应用均显示和度冷丁[1,2]有相似的镇痛效果,但无明显成瘾性。其镇痛作用产生的机理尚未完全清楚,且近年来研究表明,外周伤害性刺激等因素可激活脊髓内即刻早期基因c-fos并表达fos蛋白[3~6];P物质(substance P ,SP)被认为是脊髓伤害性信息传递物质[7],在脊髓痛觉信息传递过程中发挥着重要的作用[8],二者是疼痛在分子水平的标志。本实验运用免疫组化方法研究了痛必定注射液对CCI(chronic constriction injur,慢性结扎损伤)模型大鼠脊髓背角浅层c-fos基因表达和SP含量的影响,初步探讨痛必定注射液的镇痛机理。
1 材料
1.1 动物成年Wistar大鼠,雌雄各半,体重(200±20) g,由吉林大学实验动物中心提供。
1.2 主要试剂痛必定注射液40 mg/支,加入生理盐水2 ml,即成为浓度20 mg/ml溶液。按20 mg/kg体重剂量腹腔注射。兔抗大鼠c-fos多克隆抗体(Santa CruzBiotechnology Inc. USA ,北京中山技术有限公司分装),SP免疫组化染色试剂盒为武汉博士德生物技术有限公司产品,DAB染色试剂盒为北京中山技术有限公司产品,曲拉通X-100(Triton-100)为北京中山生物技术有限公司产品。
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